Диагностика дирофиляриоза

дирофиляриоз плотоядный собака болезнь

По данным многих авторов при постановке диагноза на дирофиляриоз необходимо учитывать следующие показатели:

• Анамнестические данные - прибытие из эндемической области или нахождение в ней.

• Клинические признаки болезни,

• Выделение микрофилярий из крови животного.

• Дополнительные лабораторные исследования

Личинок дирофилярий в крови можно обнаружить следующими лабораторными методами:

· Прямая микроскопия капли свежей крови под малым увеличением микроскопа наиболее легкий, удобный и быстрый метод диагностики дирофиляриоза. Подвижные личинки паразита заметны по их активному движению между эритроцитами. Этот метод дает надежные результаты только при высокой интенсивности инвазии. Недостатками этого метода являются: трудность диагностирования дирофиляриоза при низкой интенсивности инвазии, необходимость иметь под рукой микроскоп в рабочем положении и предметные стекла, исследование необходимо проводить сразу же после взятия крови, что создает неудобства в работе. Кроме того, при малой подвижности микрофилярий их бывает трудно обнаружить среди большого количества эритроцитов. При высокой температуре окружающего воздуха, свежий мазок крови быстро высыхает, что создает дополнительные трудности в исследовании.

· Исследование цельной сыворотки крови - для исследования сыворотки крови в пробирку берут несколько миллилитров венозной крови от собаки. Кровь сворачивается, и микрофилярии мигрируют в сыворотку. Сыворотка со сгустком должна постоять в пробирке несколько часов. После этого пастеровской пипеткой берут несколько капель сыворотки со дна пробирки или из места на границе сыворотки и сгустка крови. Эти капли помещают на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа на наличие подвижных микрофилярий. Если кровь до исследования находилась в холодильнике, то предметное стекло с каплями сыворотки выдерживают несколько минут при комнатной температуре для того, чтобы личинки дирофилярий восстановили свою подвижность. Недостатками этого метода диагностики являются: возможность постановки диагноза только через определенное время (около двух часов необходимо для отстаивания сыворотки крови). Преимущества метода: исследованиями на дирофиляриоз можно заниматься в свободное время, не отвлекаясь от основной работы; так как личинки дирофилярий сохраняют свою подвижность в сыворотке крови при комнатной температуре до трех суток, а в холодильнике при температуре +2 .+4°С до одной недели. Даже после их гибели, при наличии определенного опыта, микрофилярии легко можно обнаружить в сыворотке крови. При сворачивании крови образуется сыворотка, объем которой почти в два раза меньше цельной крови, это способствует концентрации микрофилярий и облегчает их обнаружение при невысокой интенсивности инвазии. Кроме того, в сыворотке легче обнаружить микрофилярии, чем в цельной крови, так как в данном случае отсутствуют форменные элементы крови, мешающие исследованию.

· Метод Куликова - 20 мл венозной крови смешивают с 2 мл 3,8% водного раствора лимоннокислого натрия (цитрата натрия) и отстаивают 20-30 минут. По истечении этого времени в пробирке образуется 3 слоя: внизу - эритроциты, в середине - лейкоциты и микрофилярии, вверху - плазма крови. Берут пипеткой средний слой, каплями наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют при малом и среднем увеличении.

· Архиповой Д.Р. разработан количественный метод прижизненной диагностики дирофиляриозов собак основанный на применении меланжера для подсчета количества лейкоцитов и счетной камеры Фукс-Розенталя. Меланжер до метки I заполняют кровью и до метки II раствором, состоящим из ледяной уксусной кислоты, раствора фуксина и дистиллированной воды в соотношении 3:4:93. Для равномерного смешивания меланжер с кровью и раствором кладут на вибратор на 2-3 минуты. К чистой и сухой камере Фукс-Розенталя притирают покровное стекло до появления колец Ньютона. Затем раствор в меланжере встряхивают, и каплю (но не первую) раствора наносят на среднюю часть пластинки камеры и при увеличении микроскопа в 100 раз подсчитывают количество микрофилярий во всех квадратах. Полученное количество личинок умножают на 6,23, так как для 20 мм3 раствора потребовалось бы 6,23 объема камеры. Для определения количества микрофилярий в 1 мл крови число выявленных микрофилярий в 20 мм3 умножается на 50.

· Исследование крови для обнаружения микрофилярий может быть облегчено добавлением вещества, вызывающего гемолиз. При этом методе периферическую кровь собак исследуют сразу после взятия (на месте). Каплю крови помещают на предметное стекло, добавляют две капли дистиллированной воды или 1%-ного водного раствора уксусной кислоты, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа.

· При использовании метода с применением уксусной кислоты к 1 мл венозной крови сразу же приливают 5 мл 2%-ного раствора уксусной кислоты. Смесь центрифугируют при 1000 об/мин. В течение 3-5 минут. Надосадочную жидкость выливают, а осадок микроскопируют для обнаружения микрофилярий. При этом методе личинки погибают, и их бывает трудно обнаружить в исследуемом материале.