Количественное определение флавоноидов в липофильной фракции

В липофильной фракции: Около 0,1 г, предварительно высушенного до постоянной массы, липофильной фракции (точная навеска) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляли 70 мл 95%-ного спирта и растворяли при нагревании на водяной бане при 60°С. Раствор охлаждали, доводили тем же 95%-ным спиртом до метки и перемешивали (раствор А). Затем раствор фильтровали через бумажный фильтр “синяя лента”, отбрасывая первые 10мл фильтрата. 4 мл полученного раствора переносили в мерную колбу объемом 25 мл, доводили раствор тем же 95%-ным спиртом до метки и перемешивали (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряли на спектрофотометре СФ-56 в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно 95%-ного спирта при длине волны 370 нм.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин рассчитывали по раствору стандартного образца. 0,04 г (точная навеска) стандартного образца (ФС 42-12090-72), высушенного до постоянной массы при 130 °С, в 95 % этаноле в колбе вместимостью 50 мл, доводили объем раствора 95% этанолом до метки и перемешивали. Помещали 1 мл полученного раствора в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили объем раствора 95 % этанолом до метки и перемешивали.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин в липофильной фракции (Х), в процентах рассчитывали по формуле:

,

где1 - оптическая плотность испытуемого раствора; 0 - оптическая плотность кверцетина (ГСО);0 - масса кверцетина, в г;

а - навеска липофильной фракции, г.

Количественное содержание суммы флавоноидов в липофильной фракции (Х) в процентах в пересчете на кверцетин по удельному показателю поглощению при длине волны 370 нм ( 646) рассчитывали по формуле:

,

где1 - оптическая плотность испытуемого раствора;

- удельный показатель поглощения кверцетина при длине волны 370 нм.

Результаты представлены в таблицах 13, 14.

Таблица 13

Содержание флавоноидов в липофильной фракции по раствору стандартного образца

Сумма флавоноидов, %

х - хi

(х - хi)2

Метрологические характеристики

1 2 3 4 5 6 8,52 8,54 8,69 8,97 8,43 8,87 S=52,02+ 0,15

+ 0,13

0,02

0,30

+ 0,24

,200,0225

,0169

,0004

,09

,0576

,04S=0,087 Sx=0,213 Dх=0,22 e=2,58%

х±Dх=8,67±0,22

Таблица 14

Содержание флавоноидов в липофильной фракции по удельному показателю поглощения

Сумма флавоноидов, %

х - хi

(х - хi)2

Метрологические характеристики

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7,55 7,49 7,86 7,41 7,37 7,63 S=45,31 0

+ 0,04

0,31

+ 0,14

+ 0,18

0,080

,0016

,0961

,0256

,0324

,0064S=0,073 Sx=0,178 Dх=0,19 e=2,47%

х±Dх=7,55±0,19

Выводы по главе 3

1. Установлено, что для экстракции сырья с целью получения липофильной фракции лучшим растворителем является хлороформ, так как в него перешли не только стероиды и терпены (в том числе каротиноиды), но и метоксилированный флавоноид.

. Проведен качественный анализ липофильной фракции и установлено наличие в ней биологически активных веществ, таких как: стероидов, каротиноидов и метоксилированных флавоноидов.

. С помощью физико-химических методов (ТСХ, БХ и УФ спектроскопии) доказано, что липофильная фракция содержит один метоксилированный флавоноид, который по литературным данным соответствует патулетину.

. Количественное содержание каротиноидов в липофильной фракции составило 62,7мг/%; флавоноида 8,7% (по раствору стандартного образца) и 7,6% (по удельному показателю поглощения).